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Technical articles色譜分析過程中,緩沖液是*的,因?yàn)橐盟鼇碚{(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值,緩沖鹽使用不當(dāng),后果可是吃不了兜著走。
比如說,色譜柱壓升高、柱效下降、保留時(shí)間異常等等不良影響:
1)柱壓升高;
原因:緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出,堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,阻礙流動(dòng)相傳質(zhì),引起柱壓升高。
2)相同化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化;
原因:如果沒有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣,色譜柱內(nèi)含有的鹽會(huì)使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化.
3)柱效下降;
原因:i)有些緩沖鹽會(huì)滲入到鍵合相的深處,損害硅膠基體,導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失,柱床變松,柱效下降;ii)凝結(jié)在鍵合相表面,使C18碳鏈難以舒展,對物質(zhì)的保留能力下降,導(dǎo)致柱效下降。因此用過緩沖鹽后需要對色譜柱進(jìn)行沖洗,水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應(yīng)特別引起注意。
使用前和使用后的處理都是有講究的哦!
1. 使用后的處理:用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析用流動(dòng)相*的區(qū)別是,用于沖洗的流動(dòng) 相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min,直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長的一段時(shí)間內(nèi)不使用,要長期保存,則需再加上一步,即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍,直至基線平穩(wěn)。
用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析用流動(dòng)相*的區(qū)別是,用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min,直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長的一段時(shí)間內(nèi)不使用,要長期保存,則需再加上一步,即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍,直至基線平穩(wěn). 緩沖液可以提供離子平衡的反離子,并使流動(dòng)相保持一定的離子強(qiáng)度和ph值,減少拖尾。北京富瑞恒創(chuàng)科技有限公司,成立于2009年8月,成立至今已經(jīng)和國內(nèi)多家教育機(jī)構(gòu),全國各地多家企業(yè)有過長期的合作關(guān)系,專注于新型材料試驗(yàn)機(jī)的研究,長期聘請清華大學(xué)精密儀器系的專家為技術(shù)顧問,并成立新型材料檢測儀器研發(fā)中心。
北京富瑞恒創(chuàng)科技有限公司是集專業(yè)設(shè)計(jì)、開發(fā)、生產(chǎn)與銷售于一體的高新技術(shù)股份制企業(yè),專注于新型材料試驗(yàn)機(jī)的研制、材料檢測技術(shù)的提高及材料試驗(yàn)方法的創(chuàng)新,是國內(nèi)的材料試驗(yàn)檢測儀器的生產(chǎn)企業(yè)。
富瑞恒創(chuàng)儀器研發(fā)部擁有行業(yè)內(nèi)zui的、的研發(fā)力量及技術(shù)團(tuán)隊(duì),,并成立新型材料檢測儀器研發(fā)中心,是對推動(dòng)國內(nèi)材料檢測技術(shù)的提高和試驗(yàn)方法創(chuàng)新的重要技術(shù)保證力量。富瑞恒創(chuàng)同時(shí)還與中科院自動(dòng)化研究所、國防科技大學(xué)等全國數(shù)十所科研院所開展緊密合作,并為中國國fang軍工企業(yè)及航天科技企業(yè)和重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室定制生產(chǎn)了大量標(biāo)準(zhǔn)和非標(biāo)準(zhǔn)的測試儀器。
2. 使用前的處理: 在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱,直至基線平穩(wěn)。 原則上,用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。理由:緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí))流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí),如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對較小,不先沖洗掉,接下來做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大,而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí),緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出,沉積下來,這將可能導(dǎo)致上述對色譜柱的損害.
注意事項(xiàng)什么的,是關(guān)注的重點(diǎn)!
1:避免使用鹽酸鹽,鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用。
2:緩沖液要現(xiàn)配現(xiàn)用,往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液,隔天或放置長時(shí)間實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。
3:實(shí)驗(yàn)后不可用有機(jī)溶劑直接過度,有機(jī)溶劑會(huì)處使鹽類析出,造成液路或色譜柱堵塞,可用95:5的水甲醇沖洗。
4:使用緩沖液要及時(shí)掌握ph范圍,做到胸中有數(shù)。
5:清洗液路和柱子時(shí),有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。
6:長時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出,若有白色鹽類析出,可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路(拆下柱子,走30ml,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞。
7:選擇緩沖液要用可靠的試劑,避免不純的鹽類造成不必要的麻煩。
如果流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例很高是不能用來沖洗緩沖鹽的,是洗不出來的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇沖洗,是可以把緩沖鹽沖洗出來的,然后用純的有機(jī)溶劑來保護(hù)柱子。的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換,一般在15分鐘以內(nèi),且用0.8的流速較好. 如果用純水沖,容易造成鍵合的碳鏈的流失,用5%~10%甲醇水溶液沖. 可以用純水代替流動(dòng)相中的緩沖液,有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。